皮質醇ELISA試劑盒操作時的注意事項

　　皮質醇ELISA試劑盒是一種比色競爭性酶免疫測定試劑盒，可在3小時內得出結果。在405nm處讀取吸光度。該套件在同行評審的出版物中被高度引用。提供的即用型液體顏色編碼試劑安全、無放射性，可減少實驗室中的錯誤。寬廣的動態范圍可讓您準確測量各種樣品基質中的皮質醇水平。

　　皮質醇ELISA試劑盒操作注意事項：

　　1、正式試驗時,應分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件,待檢樣品應作一式二份,以保證實驗結果的準確性。有時本底較高,說明有非特異性反應,可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。

　　2、在ELISA中,進行各項實驗條件的選擇是很重要的,其中包括:

　　1）固相載體的選擇:許多物質可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。當前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進行篩選:用等量抗原包被,在同一實驗條件下進行反應,觀察其顯色反應是否均一性,據此判明其吸附性能是否良好。

　　2）包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時,要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18~24小時。蛋白質包被的適濃度需進行滴定:即用不同的蛋白質濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進行包被后,在其它試驗條件相同時,觀察陽性標本的OD值。選擇OD值*而蛋白量最少的濃度。對于多數蛋白質來說通常為1~10μg/ml。

　　3）酶標記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定(見酶標記抗體部份)。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實驗系統里準確地滴定其工作濃度。

　　4）酶的底物及供氫體的選擇:對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應,而本身無色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致作用,應注意防護。有條件者應使用不致、靈敏度高的供氫體,如TMB和ABTS是當前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后,應加入強酸或強堿以終止反應。通常底物作用時間,以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制,尤其是H2O2在臨用前加入。