降鈣素ELISA試劑盒操作時有哪些步驟是值得注意的？

　　降鈣素ELISA試劑盒采用雙抗體夾心法酶聯免疫吸附檢測技術，測定樣品中人降鈣素原水平，向預先包被了抗人降鈣素原抗體的酶標孔中，加入標準品和樣本，溫育后，加入標記的抗降鈣素原抗體，再與HRP標記的鏈霉親和素結合，形成免疫復合物，再經過溫育和洗滌，去除未結合的酶，然后加入顯色底物TMB，產生藍色，并在酸的作用下轉化成黃色，在450nm處測定反應孔樣品吸光度值，樣本中的人降鈣素原濃度與OD值成正比，通過繪制標準曲線計算出樣本中人降鈣素原的濃度。

　　降鈣素ELISA試劑盒操作步驟：

　　1、加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100，余孔分別加標準品或待測樣品100，注意不要有氣泡，加樣時將樣品加于酶標板底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜，37溫育2小時。為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。

　　2、棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液100（臨用前配制），酶標板加上覆膜，37溫育1小時。

　　3、棄去孔內液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400/每孔，甩干（也可輕拍將孔內液體拍干）。

　　4、每孔加檢測溶液B工作液（臨用前配制）100，加上覆膜，37溫育1小時。

　　5、棄去孔內液體，甩干，洗板5次，方法同步驟3。

　　6、每孔加底物溶液90，酶標板加上覆膜37避光顯色（反應時間控制在15-30分鐘，當標準孔的前3-4孔有明顯的梯度藍色，后3-4孔梯度不明顯時，即可終止）。

　　7、每孔加終止溶液50，終止反應，此時藍色立轉黃色。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。

　　8、立即用酶標儀在450nm波長測量各孔的光密度（值）。

　　降鈣素ELISA試劑盒在人體內，主要由甲狀腺的濾泡旁細胞(也稱為C細胞)產生，在其他動物中，由末咽體產生，它的作用是降低血鈣(Ca2+)，抵抗甲狀旁腺激素(PTH)，在魚類、爬行動物、鳥類和哺乳動物中發現了降鈣素。